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血清,你不能不知道的一些事情!
2019/07/27

要做细胞培养,首先要了解的是,要用什么样的血清。

 

 

 

普通的细胞培养,血清是必不可少的,当然啦,也有一些需要无血清培养。比如一些CIK细胞,不能用动物源性的血清进行培养,以免会输到人体之后,导致产生异体免疫反应。胎牛血清(FBS)是zui常用,也是zui理想的细胞生长的补充试剂,通常优于其他类型的细胞培养血清。

 

主要是由于血清中含有丰富的营养以及细胞生长因子,这些都是细胞生长必不可少的。那为啥不用成年牛的血清,或者新生牛的血清呢?很简单因为胎牛体内抗体含量低,不会造成与细胞的抗体的交叉反应。一般胎牛都是取自奶牛场的小公牛,因为它们不会产奶,好吧……

 

 

 

那问题又来了,有时候会人的细胞养出一堆黑乎乎的颗粒,很多人管这个叫黑胶虫。但其实并没有确定一定有黑胶虫这种生物,而且这玩意是呈布朗运动的,就是随机的无规则运动。有很多人认为可能这玩意是一种蛋白结晶,有的认为这是一种原虫,但Google上是搜不到黑胶虫的。瓦特唉ver,这玩意儿会影响细胞生长。

 

 

 

对于这个,有很多人认为这个跟血清的产地有关系。为啥米国人要把血清分级啊,肯定是低级的引起了黑胶虫污染,也挺难说到底是不是这样的。嘛,那米国人为啥要给血清分级呢?因为米国农业部(USDA)认为,有个别国家没有牛海绵状脑病(BSE,就是疯牛病啦)和口蹄疫(FMD),这些国家的FBS肯定要一些。这些没有疫情的国家包括澳洲、北美洲和中美洲,但米国农业部只允许新西兰和加拿大的牛血清,在不进行测试的情况下进口到美国。其他国家,比如澳大利亚,墨西哥之类的中美洲国家啥的,都需要检测使命蓝舌病毒、赤坂病毒等等。而南美洲被认为是疫情严重地区,是坚决不允许进入米国市场的。

 

 

从世界动物卫生组织是政府间动物卫生技术组织OIE(http://www.oie.int/animal-health-in-the-world/official-disease-status/bse/list-of-bse-risk-status/)公布的数据来看,其实美国和加拿大本身都有BSE疫情,这也真的是蛮奇怪的,没有BSE疫情的反而是一些南美国家包括:乌拉圭、哥伦比亚、巴拉圭、秘鲁、巴西、阿根廷这些反而是没有BSE疫情的地方,但米国就是这样任性,说什么也不进口南美的。

 

 

但口蹄疫的疫情,南美更严重些。

 

澳洲的血清就更贵一些,为啥呢?因为大家认为澳洲的血清都是被隔离在大岛上生产出来的,天然,纯净(没有进口牛),无污染。和奶粉一个道理……这样的话,南美的血清就便宜到爆了。所以会有大批的商人,用南美血清,冒充澳洲血清。

 

那问题来了,这样的话会有什么样的危害呢?

 

说到危害,我们又要讲一个概念,就是血清收集的方法以及血清制品的处理,zui关键的血清处理就在于过滤、去除内毒素和血红蛋白。血红蛋白会对细胞有很大的影响,特别是培养干细胞,使用的血清的血红蛋白含量必须≤10mg/dl,内毒素含量也需要≤10EU/ml。过滤也需要使用从0.04μm至0.45μm范围的滤器,一般来说,0.04μm的滤器可以过滤掉基本所有的支原体和真菌细菌,但劣质点的血清不会用这样的滤器。这个的行业内标准是用三个0.1μm的滤器来过滤。

 

的胎牛血清的指标大概是这样的:

 

1)血红蛋白≤10mg/dl(≤20mg/dl的话也说得过去的,记住FBS越红越嗦,就是越红越烂;颜色越浅,等级就越高

 

2)内毒素≤10EU/ml

 

3)总蛋白含量:30-40mg/ml(多了就不是胎牛了,可能是新生牛血清或者成年牛血清冒充的

 

4)产地:澳洲>北美>中美>…>南美>国产(因为好多国产都是一字记之曰“乱来

 

质量差的血清越容易出问题。